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食品中紐甜的測定SPE-HPLC法
參考GB 5009.247-2025 《食品安全國家標準 食品中紐甜的測定》
第一法 液相色譜法
紐甜是一種功能性甜味劑，區(qū)別于其他強力甜味劑常帶的苦味和金屬味，其具有純正的甜味，甜味協(xié)和，十分接近阿斯巴甜。甜度比蔗糖甜7000～13000倍，比阿斯巴甜甜30～60倍?？稍谒矔r高溫的條件下保持穩(wěn)定，能量值幾乎為零。
GB 5009.247-2025《食品安全國家標準 食品中紐甜的測定》于2025年3月16日發(fā)布并將于2025年9月16日實施，迪馬科技依據(jù)此標準第一法 液相色譜法，建立了食品中紐甜的測定方法。使用ProElut® PLS (Cat.#：68005)固相萃取柱進行樣品凈化，Diamonsil® Plus 5μm C18, 150 x 4.6mm(Cat.#: 99401)色譜柱分離檢測紐甜，方法定量限為5mg/kg，回收率在85%~100%之間。該方法在標準液相梯度條件下，果凍、巧克力、橙汁等樣品在檢測時能夠使紐甜與雜質達到較好的分離效果，保證結果的穩(wěn)定性及重現(xiàn)性。
本方案適用于果凍、巧克力和橙汁等樣品中紐甜的測定，定量限為5mg/kg。
紐甜1000μg/mL標準儲備液：準確稱量10mg 紐甜(Cat.#: 48679)于10mL容量瓶中，用甲酸-三乙胺緩沖液*溶解并定容至10mL。
甲酸-三乙胺緩沖液*：分別吸取0.8mL甲酸和2.5mL三乙胺，加水定容至1L，pH約為4.5。
3.1 果凍等
準確稱取5g樣品于50mL離心管中，加入25mL混合提取液*，于60℃水浴振蕩30min。冷卻至室溫，用甲酸或氨水溶液(20%)*調pH至4.5，超聲30min。加入1mL亞鐵qinhuajia溶液(92g/L)*和1mL乙酸鋅溶液(183g/L)*，渦旋混勻1min，8000rpm離心5min。上清液經濾紙過濾并轉移至50mL容量瓶中。殘渣加入20mL混合提取液*，振蕩5min，8000rpm離心5min，上清液經同一濾紙過濾合并，用混合提取液*沖洗濾紙數(shù)次并定容至刻度，混勻，待凈化。
3.2 巧克力等
準確稱取5g樣品于50mL離心管中，加入25mL混合提取液*，于60℃水浴振蕩30min。加5mL正己烷，振蕩5min，8000rpm離心5min，棄去正己烷層。用甲酸或氨水溶液(20%)*調pH至4.5，超聲30min。加入1mL亞鐵qinhuajia溶液(92g/L)*和1mL乙酸鋅溶液(183g/L)*，渦旋混勻1min，8000rpm離心5min。上清液經濾紙過濾并轉移至50mL容量瓶中。殘渣加入20mL混合提取液*，振蕩5min，8000rpm離心5min，上清液經同一濾紙過濾合并，用混合提取液*沖洗濾紙數(shù)次并定容至刻度，混勻，待凈化。
3.3 橙汁等
準確稱取5g樣品于50mL離心管中，加入25mL混合提取液*，振蕩5min。用甲酸或氨水溶液(20%)*調pH至4.5，超聲30min。加入1mL亞鐵qinhuajia溶液(92g/L)*和1mL乙酸鋅溶液(183g/L)*，渦旋混勻1min，8000rpm離心5min。上清液經濾紙過濾并轉移至50mL容量瓶中。殘渣加入20mL混合提取液*，振蕩5min，8000rpm離心5min，上清液經同一濾紙過濾合并，用混合提取液*沖洗濾紙數(shù)次并定容至刻度，混勻，待凈化。
混合提取液*：量取甲醇400mL至1L燒杯，加500mL甲酸-三乙胺緩沖液，用甲酸調pH到4.5，轉移至1L容量瓶，用甲酸-三乙胺緩沖液定容至刻度。
亞鐵qinhuajia溶液(92g/L)*：稱取106g亞鐵qinhuajia，加入適量水溶解，用水定容至1L。
乙酸鋅溶液(183g/L)*：稱取220g乙酸鋅，加入適量水溶解，加入30mL冰乙酸，用水定容至1L。
氨水溶液(20%)*：量取200mL氨水至1L容量瓶中，用水定容至刻度。
ProElut® PLS 500mg/6mL (Cat.#: 68005)
(1)活化：依次加入6mL甲醇、6mL水，棄去流出液；
(2)上樣：取10mL待凈化液加入柱中，棄去流出液；
(3)淋洗：加入5mL甲酸-三乙胺緩沖液*，棄去流出液；
(4)洗脫：加入8mL混合洗脫液*，洗脫完畢后，推干小柱，收集所有流出液；
(5)重新溶解：將洗脫液于60℃水浴氮吹濃縮至1mL，加甲酸-三乙胺緩沖液*定容至2mL，過0.45μm PTFE濾膜(Cat.#: 37182)，上機分析。
甲酸-三乙胺緩沖液*：分別吸取0.8mL甲酸和2.5mL三乙胺，加水定容至1L，pH約為4.5。
混合洗脫液*：量取甲醇700mL至1L容量瓶，用甲酸-三乙胺緩沖液定容至刻度。
色譜柱：Diamonsil® Plus C18，150x4.6mm，5μm (Cat.#: 99401)
流 速：1.0mL/min
進樣量：50μL
柱 溫：30℃
檢測器：PDA 210nm
流動相：A：乙酸銨溶液(20mmol/L)：稱取1.54g乙酸銨，用500mL水溶解，加入1mL冰乙酸，加水定容至1L，B：甲醇
果凍、巧克力和橙汁等中紐甜測定的添加回收結果
下載方案